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使用激光共聚焦顯微鏡之前有那些準備工作

返回列表 來源:本站 發(fā)布日期:2024-09-11 13:44:08【

使用激光共聚焦顯微鏡之前的準備工作主要包括以下幾個方面:

一、設備檢查與準備

電源與連接檢查:

確保電源線和數據線連接正常,以保證設備供電和數據傳輸的穩(wěn)定性。

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激光源檢查:

檢查激光源是否正常工作,激光功率是否穩(wěn)定,這是確保成像質量的關鍵。

鏡頭與濾光片清潔:

檢查鏡頭和濾光片是否清潔,清除灰塵和污漬,以保證成像的清晰度和準確性。

軟件與硬件檢查:

確保系統(tǒng)軟件正常運行,檢查鏡頭和濾光片的安裝是否正確,確保成像時的光路通暢。

二、樣品準備

載玻片與蓋玻片處理:

選擇質量好、光潔、無雜質的載玻片和蓋玻片。對于重要實驗,需提前檢查其光學特性,確保無熒光干擾。

蓋玻片的厚度應小于0.17mm,使用前需經過玻璃洗液浸泡處理一天以上,鉻酸浸泡過夜,去離子水沖洗后,再用無水乙醇浸泡待用。臨用前需在酒精燈上過火滅菌處理。

樣品制備:

細胞樣品:細胞爬片制備需確保細胞貼壁牢固,對于貼壁不牢的細胞或特定研究,需預先包被細胞外基質。也可使用玻璃底的共聚焦專用培養(yǎng)皿進行細胞接種。

組織樣品:實驗標本需為單層,并能很好地貼附在樣品池中,無論是石蠟切片還是冰凍切片,均應盡量薄。用于免疫熒光抗體標記的組織切片還需經過特殊處理以防止脫落。

樣品標記與固定:

樣品需經熒光探針標記(可單標、雙標、三標),并使用適當的固定劑和封片劑進行處理。

三、系統(tǒng)啟動與設置

系統(tǒng)啟動:

按下電源按鈕,等待系統(tǒng)啟動。檢查系統(tǒng)軟件是否正常運行,如有異常及時聯系維修人員。

激光源開啟與設置:

開啟激光源,根據需要選擇合適的激光波長和功率。

物鏡與掃描鏡調節(jié):

調節(jié)掃描鏡和物鏡的位置,使光線準確聚焦在樣品上。

四、安全注意事項

在整個準備過程中,需嚴格遵守實驗室安全規(guī)范,避免直接接觸激光光束以防止對眼睛造成傷害。

注意防止液體樣品溢出到設備中,以免損壞設備和危及人身安全。

綜上所述,使用激光共聚焦顯微鏡前的準備工作涉及設備檢查、樣品準備、系統(tǒng)啟動與安全注意事項等多個方面,確保這些步驟的正確執(zhí)行對于獲得高質量的成像結果至關重要。

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